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[染色]吉姆萨染色液染色步骤分析

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吉姆萨染色染的是DNA的磷酸基,常用于染色体一般用此染料。血涂片一般常规都用吉姆萨染过的(否则是看不见其他细胞的),可以观察更多细胞结构。血涂片染色后更好看到白细胞类或寄生虫等。

吉姆萨染色原理

吉姆萨染液是由天青与伊红组成。各种细胞成分化学性质不同,对各种染料的亲和力也不一样。嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结合,被染成粉红色;嗜碱性颗粒如细胞核蛋白或淋巴细胞胞浆为酸性物质,与碱性染料美蓝或天青结合,被染成紫蓝色;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,呈淡紫色。各类成分由于自身特性与吉姆萨染液中不同物质结合呈现不同颜色从而得以区分。吉姆萨染色液可将细胞核染成紫红色或蓝紫色,胞浆染成粉红色,在光镜下呈现出清晰的细胞染色图像。主要用于显示血涂片中各种血细胞形态大小差异,染色效果好、染色力强、着色清晰。

染液配制

吉姆萨(Giemsa'sstain;天青-伊红)染色

1、吉姆萨染料是伊红(AzurIIEqsin) 和天青(蓝)2号合成的。

2、吉姆萨染料(Giemsa,天青-伊红)染液配制:

吉姆萨染料(粉末) 0.5g 或 7.5g

甲醇( AR ) 33ml 或 500ml

甘油( AR ) 33ml 或 500ml

先将吉姆萨染料放入乳钵中,逐渐倒甘油研磨溶于甘油中,置于 56℃水温箱内,90~120分钟,然后加入甲醇,摇匀后放置数天,过滤后或不过滤即可使用。保存于棕色瓶中。一般两周后使用为好。临用时将贮备液与 pH 6.8的磷酸缓冲液按照 1:20混合。

染液鉴定

吉姆萨染色液鉴定:刚配好或放置一个月以上的染液可进行下列鉴定:

1、取1滴染液于乳白玻板上,自行迅速扩散开,其颜色变紫红色,且有伪足形成。

2、取1滴染液加1滴缓冲液,染液由深蓝色立即变为紫红色。

3、取血片或骨髓片进行试染检查,观察染色后各类细胞的胞核、胞浆及颗粒着色情况, pH是否合适及染色合适时间。如有上述变化,表明染液合格,可供使用。

染色步骤

1、将制备好的细胞涂片放置染色架上,滴加稀释好的染色液使其覆盖全部血膜,室温染色15~30min。

2、用自来水缓慢从玻片一端冲洗 (注意勿先倒去染液或直接对血膜冲洗 ),晾干后镜检。

注意事项:

1、为了安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2、如果染色过浓或者过淡,请自行调整染色时间或吉姆萨工作液浓度。

3、原液稀释后可能会出现少量沉淀,不影响使用;染色结束用水洗净即可。

4、吉姆萨原液采用常规方法配制并用滤纸过滤,请在使用时不要接触到水。否则时间长了会失效。

5、PH对细胞染色有影响。染色用载玻片必须清洁,无酸碱污染以免影响染色结果。


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以上内容来自小编zzj 2021.1.22

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本文由齐岳Lh整理,2022-05-20 09:44:30

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