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SMCC4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯CAS64987-85-5

SMCC 4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯是美国AAT Bioquest生产的荧光染料,SMCC是一种不可裂解且可透膜的交联剂,间隔臂为8.3Å。它含有胺反应性琥珀酰亚胺酯(SE)和巯基反应性马来酰亚胺基团。NHS酯在pH 7-9下与伯胺反应形成稳定的酰胺键。马来酰亚胺与pH6.5-7.5的巯基反应形成稳定的硫醚键。SMCC的SE组与载体蛋白上的赖氨酸残基反应,将它们转化为反应性马来酰亚胺。SMCC是一种广泛用于产生稳定的马来酰亚胺激活的载体蛋白的试剂,其可以自发地与巯基反应。或者,可将这些相对稳定的马来酰亚胺活化的中间体冻干并储存,以便随后与半抗原缀合。齐岳生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供*优质的SMCC 4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯。 

产品说明书

操作方案

1.制备含胺蛋白质的缀合缓冲液,蛋白质-NH 2 (缓冲液A):磷酸盐缓冲盐水(PBS,pH 7.2)或pH值为7.2至8.0的其他无胺缓冲液可用于此。

注意:避免在缀合过程中含有伯胺(如Tris或甘氨酸)和巯基的缓冲液,因为它们会与预期的反应竞争。如有必要,将样品透析或脱盐至适当的缓冲液如PBS中。

 

2.制备含巯基蛋白质的缀合缓冲液,蛋白质-SH(缓冲液B):pH为6.5-7.5的不含巯基的缓冲液可用于此。

注1:在缀合过程中避免使用含有巯基的缓冲液,因为它们会与预期的反应竞争。如有必要,将样品透析或脱盐至适当的缓冲液如PBS中。

注2:加入1-5mM EDTA有助于螯合二价金属,从而减少含巯基蛋白质中的二硫化物形成。

 

3.准备脱盐柱,将改性蛋白与过量交联剂和反应副产物分离。

 

4.在其缀合缓冲液A和缓冲液B中制备含胺蛋白质(蛋白质-NH2)和含巯基蛋白质(蛋白质-SH)溶液。

 

5.制备蛋白质1-NH 2 -SMCC(或SMCC Plus )缀合物:将适量的SMCC(或SMCC Plus )加入到缓冲液A中的含胺蛋白质溶液中。蛋白质-NH 2的浓度 决定SMCC(或SMCC Plus )摩尔过量使用。SMCC(或SMCC Plus )摩尔过量的建议体积如下,但*佳比例必须使用目标蛋白质通过实验确定:

  • 蛋白质样品<1 mg / mL使用40-80倍摩尔过量。
  • 1-4 mg / mL的蛋白质样品使用20倍摩尔过量。
  • 5-10 mg / mL的蛋白质样品使用5至10倍摩尔过量。

 

6.将上述反应混合物在室温下孵育30-60分钟或在4℃孵育2-4小时。

注1:为了在完成前停止缀合反应,加入含有还原半胱氨酸的缓冲液,其浓度比Protein-SH的巯基浓度高几倍。

注2:可以通过电泳分离和随后的蛋白质染色来估计缀合效率。

 

7.使用用共轭缓冲液A平衡的脱盐柱除去多余的SMCC(或SMCC Plus )。

 

8.将含硫醇(蛋白-SH)和脱盐的含胺蛋白(蛋白-NH 2)SMCC(或SMCC Plus )缀合物混合并混合,摩尔比对应于*终缀合物所需的摩尔比,并与亲属一致两种蛋白质上存在的巯基和活化胺的数量。

注意:与马来酰亚胺部分反应的分子必须具有游离(还原的)巯基。对于蛋白质,在室温下使用5mM TCEP还原二硫键30分钟,然后通过合适的脱盐柱两次。请注意,蛋白质(例如抗体)可能会通过完全还原其二硫键而失活。可以用2-巯基乙胺·HCl(2-MEA)实现IgG中铰链区二硫键的选择性还原。可以使用N-琥珀酰亚胺基S-乙酰硫代乙酸酯(SATA)或2-亚氨基硫杂环戊烷·盐酸盐(Traut's Reagent)将巯基化合物添加到分子中,后者可以修饰伯胺。

 

参考文献

N-glycan targeted gene delivery to the dendritic cell SIGN receptorAuthors: Kevin Anderson, Christian Fernandez, Kevin G RiceJournal: Bioconjugate chemistry (2010): 1479--1485

荧光染料,由于灵敏度高,操作方便,逐渐取代了放射性同位素作为检测标记,其广应用于荧光免疫,荧光探针,细胞染色等。包括特异性的DNA染色,用于染色体分析、细胞周期、细胞凋亡等相关研究。另有很多核酸染料在多色染色系统中是很有用的复染剂,可作为背景对照,标记细胞核使细胞内结构的空间关系一目了然。

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本文由齐岳Lh整理,2022-07-22 11:07:10

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