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Amplite荧光素酶报告基因检测试剂盒

Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于荧光素酶报告基因检测的试剂盒。β-半乳糖苷酶,β-葡萄糖醛酸酶和荧光素酶是常见的报告基因。*好的多功能常见报告基因是来自于北美的萤火虫Photinus pyralis的荧光素酶。此酶蛋白的活性不需要进行蛋白质翻译后修饰获得。它在活细胞中高浓度积累不会造成细胞毒性,可以在原核和真核细胞中使用。在ATP、镁离子和氧存在的条件下,萤火虫荧光素酶催化荧光素氧化形成生物荧光。Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒利用与荧光强度相关的公式来定量检测活细胞和细胞抽提物中的荧光素酶。在荧光素酶的催化下,我们的试剂/试剂盒会产生具有强烈荧光的荧光产物。本试剂盒提供所有的必需组分,并且经过优化处理,我们还提供可以用于HTS(高通量筛选)实验方案。本试剂盒具有非常好的灵敏度,可以用于对灵敏度有要求的分析。齐岳生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供*优质的Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒。 

齐岳问号:荧光素酶到底该如何检测?

 

适用仪器


发光酶标仪 
推荐孔板:白色孔板
产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备细胞(样品)(96孔板是100 µL /孔,384孔板是25 µL /孔)2.添加等量的萤光素酶工作溶液3.在室温下孵育10-20分钟4.检测560 nm处的荧光强度

 

溶液制备 

1.工作溶液配制

将全部反应缓冲液(组分B)转移到荧光素酶(组分A)的瓶中,并充分混合以制成荧光素酶工作溶液。

点击查看细胞制备指南

 

样品操作及分析

1.进行荧光素酶检测:

1.1通过在所需化合物缓冲液中加入10 µL 10X测试化合物(96孔板)或5 µL 5X测试化合物(384孔板)来用检测化合物处理细胞(或样品)。 对于空白孔(没有细胞的培养基),添加相应量的化合物缓冲液。

1.2将细胞板在5%CO2培养箱中于37°C孵育一段时间(通常为4小时至过夜)。

1.3每孔荧光素酶工作溶液添加100 µL(96孔板)或25 µL(384孔板)。

1.4避光在室温下孵育平板10-20分钟。

1.5用酶标仪检测荧光强度。

 

2.建立标准的萤光素酶校准曲线:注意:如果需要计算样品中萤光素酶的**量,则应与上述测定法一起生成萤光素酶标准曲线。

2.1使用不含萤光素酶的样品(作为对照)来检测背景发光,在含0.1%BSA的PBS缓冲液中进行一系列萤光素酶稀释液。 注意:通常萤光素酶的浓度从1 pg / mL到1 ng / mL是合适的。

2.2将100 µL /孔(96孔板)或25 µL /孔(384孔板)的稀释的荧光素酶溶液添加到一个空板中。

2.3加入100 µL /孔(96孔板)或25 µL /孔(384孔板)的荧光素酶工作溶液。

2.4在避光的条件下,将反应混合物在室温下孵育10-20分钟。

2.5用标准酶标仪记录荧光强度。

2.6生成荧光素酶标准曲线。

 

参考文献

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Microwave ablation-assisted liver gene transfection in ratsAuthors: Ruoyu Jiang, Lingkai Meng, Longhao Sun, Xianghui He, Xiaoyu Liang, Jie Zhang, Zhixiang ZhangJournal: International Journal of Hyperthermia (2016): 666--672

Activation of relaxin family receptor 1 from different mammalian species by relaxin peptide and small-molecule agonist ML290Authors: Zaohua Huang, Courtney Myhr, Ross AD Bathgate, Brian A Ho, Amaya Bueno, Xin Hu, Jingbo Xiao, Noel Southall, Elena Barnaeva, Irina U AgoulnikJournal: Frontiers in endocrinology (2015)

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Discovery of ML367, inhibitor of ATAD5 stabilizationAuthors: Jason M Rohde, Ganesha Rai, Yong Jun Choi, Srilatha Sakamuru, Jennifer T Fox, Ruili Huang, Menghang Xia, Kyungjae Myung, Matthew B Boxer, David J MaloneyJournal: (2013)

荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轮双键体系化学结构的化合物,受到紫外光或蓝紫光照射时,可激发成为激发态,当从激发态恢复基态时,发出荧光。荧光标记技术指利用荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上,利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。荧光标记的无放射物污染,操作简便等优点,使得荧光标记物在许多研究领域的应用日趋广。

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本文由齐岳Lh整理,2022-07-22 11:07:20

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