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荧光底物FAM-LETD-FMK

荧光底物FAM-LETD-FMK是美国AAT Bioquest生产的荧光底物,caspase 的激活在细胞凋亡中起着核心作用。 FAM-LETD-FMK 为灵敏检测活细胞中活化的 caspase-8 提供了一种方便的方法。 它是细胞可渗透的、无毒的,并且不可逆地与凋亡细胞中激活的 caspase-8 结合。 FAM 标签允许通过荧光显微镜、流式细胞术或荧光读板器直接检测凋亡细胞中活化的半胱天冬酶。齐岳生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供*优质的荧光底物FAM-LETD-FMK。

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产品说明书

样品实验方案

以下说明书仅提供指南,实际应根据您的具体需求进行修改。

1.使用AMC,AFC,pNA,R110和ProRed底物的一般溶液Caspase测定

1.1在DMSO中制备10mM储备溶液。

1.2制备2X半胱天冬酶底物(50μM)测定溶液,如下所示:

50 L基质原液

100L DTT(1M)

400L EDTA(100 mM)

10mL Tris缓冲液(20mM),pH = 7.4

1.3将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液(来自步骤1.2)混合,并在室温下孵育溶液至少1小时。

1.4使用荧光酶标仪检测荧光,或使用吸光度酶标仪检测吸光度。

 

2.细胞Caspase检测使用细胞渗透FMK半胱天冬酶探针

2.1在DMSO中制备2-5mM储备溶液。

2.2根据需要对细胞进行处理。

2.3通过用20mM Hepes缓冲液(HHBS)稀释Hanks中的DMSO储备溶液(来自步骤2.1),制备2X可渗透的半胱天冬酶底物(20μM)测定溶液。

2.4用2X半胱天冬酶底物测定溶液(来自步骤2.3)混合等体积的处理细胞,并将细胞在37℃,5%CO 2培养箱中孵育至少1小时。

2.5用HHBS洗涤细胞至少一次。

2.6用流式细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

 

3.细胞Caspase检测使用细胞渗透性FMK Caspase探针(仅适用于#13470-13476)

3.1通过向小瓶中加入50μLDMSO制备250X储备溶液。

3.2根据需要对细胞进行处理。

3.3将250 X DMSO储备溶液(来自步骤3.1)以1:250的比例(例如2 uL至500 uL细胞)添加到细胞溶液中,并将细胞在37°C,5%CO 2培养箱中孵育1 小时。

3.4用HHBS洗涤细胞至少一次。

3.5用流式细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

 

参考文献

Activation of caspase-like activity and poly (ADP-ribose) polymerase degradation during sporulation in Aspergillus nidulansAuthors: Thrane C, Kaufmann U, Stummann BM, Olsson S.Journal: Fungal Genet Biol (2004): 361

[Antitumor mechanism of 3-bromopropionylamino benzoylurea on leukemia and lymphoma]Authors: Li JN, Song DQ, Jiang JD.Journal: Yao Xue Xue Bao (2004): 491

Caspase-dependent and independent cell death in rat hepatoma 5123tc cellsAuthors: Pandey S, Smith B, Walker PR, Sikorska M.Journal: Apoptosis (2000): 265

C-myc antisense oligodeoxynucleotides can induce apoptosis and down-regulate Fas expression in rheumatoid synoviocytesAuthors: Hashiramoto A, Sano H, Maekawa T, Kawahito Y, Kimura S, Kusaka Y, Wilder RL, Kato H, Kondo M, Nakajima H.Journal: Arthritis Rheum (1999): 954

ICG是一种带负电荷的聚甲基菁染料,跟CY3,CY5,CY7这些菁染料不同的是他有这更高的吸收和发射波长,它的波长是800nm,虽然ICG的跟CY7.5的波长接近,但ICG却有着cY7.5无法达到的血红细胞结合能力。

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本文由齐岳Lh整理,2022-07-25 09:52:54

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