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线粒体膜电位荧光探针JC-1CAS3520-43-2

线粒体膜电位荧光探针JC-1是美国AAT Bioquest生产的用于线粒体膜电位检测的试剂,JC-1广泛用于通过流式细胞术确定线粒体膜电位。它能够选择性地进入线粒体,并且随着线粒体膜电位增加(超过约80-100mV的值)可逆地将其颜色从绿色变为橙色。这种性质是由于线粒体膜极化后JC-1聚集体的可逆形式导致发射光从530nm(即JC-1单体形式的发射)转变为590nm(即J-聚集形式的发射)。当在490nm处激发时,随着线粒体膜变得更加极化,JC-1的颜色从绿色橙色可逆地变为绿色橙色。使用通常安装在所有流式细胞仪中的滤波器可以检测两种颜色,可以在荧光通道1(FL1)中分析绿色发射,在通道2(FL2)中分析绿色橙色发射。使用JC-1的主要优点是,它可以从绿色到橙色荧光发射转移,它既可以定性,又可以在FL1和FL2通道中检测到纯荧光强度又可以定量。除了广泛用于流式细胞仪外,JC-1还用于荧光成像。我们已经开发出一种在荧光酶标仪平台中使用它的方案,尽管JC-1在许多实验室中被广泛使用,但其水溶性差使得它在某些应用中难以使用。我们的JC-10具有比JC-1更好的水溶性,并且JC-10在一些细胞系中具有优于JC-1的性能。齐岳生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供*优质的线粒体膜电位荧光探针。

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适用仪器


流式细胞仪 
激发:488nm激光
发射:530/30nm,575/26nm滤波片
推荐孔板:FITC,PE通道
荧光显微镜 
激发:490nm
发射:525nm(比率分析:590nm)
推荐孔板:黑色透明
通道:FITC和TRITC滤波片
荧光酶标仪 
激发:490nm
发射:525nm(比率分析:590nm)
推荐孔板:黑色孔板
产品说明书

JC-1样品分析方案

概述

用测试化合物制备细胞

添加JC-1工作溶液(100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板)在室温或37℃孵育1小时

移除JC-1工作溶液

读取 Ex / Em = 490 / 525nm和490 / 590nm处的荧光强度

注意:以下是我们推荐的活细胞方案。该方案仅提供指南,实际情况应根据您的具体实验进行调整修改。

 

1.准备JC-1工作溶液:

1.1在高质量无水DMSO中制备2至10 mM JC-1的储备液。 应随用随配及时使用或等分配制,应将使用剩余的溶液等分并在<-20℃冷冻。

注意:避免反复冻融循环,避免光照。

1.2制备1X JC-1工作溶液:在实验当天,将JC-1固体溶解在DMSO中或将等分试样的JC-1储备溶液解冻至室温。在Hanks和20 mM Hepes缓冲液(HHBS)或其他缓冲液(pH 7)和0.02%Pluronic®F-127中制备10至30μM1XJC-1工作溶液。

注意:JC-1不溶于水,因此它会在溶液中聚集。 建议在将JC-1工作溶液加载到微孔板之前对其进行过滤。

 

2.用荧光酶标仪进行JC-1检测:

2.1用测试化合物细胞培养所需的一段时间(例如,Jurkat细胞可以用喜树碱处理4-6小时)以诱导细胞凋亡。对于空白孔(没有细胞的培养基),加入相应量的化合物缓冲液。

2.2将100μL/孔的96孔板或25μL/孔的384孔板的JC-1工作溶液(来自步骤1.2)加入到细胞板中。

2.3将JC-1加载在37℃,5%CO2培养箱中培养15-60分钟。

注意:适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度,每个实验的孵育时间需要根据相应实验进行控制。

2.4从平板上取下JC-1工作溶液,用HHBS或其他缓冲液清洗细胞。 将100μL/孔的96孔板或25μL/孔的384孔HHBS板加回到细胞板中。

2.5监测Ex / Em = 490 / 525nm和490 / 590nm处的荧光变化以进行比率分析。

 

3.用荧光显微镜或流式细胞仪进行JC-1测定:

3.1用测试化合物细胞培养所需的一段时间(例如,Jurkat细胞可以用喜树碱处理4-6小时)以诱导细胞凋亡。

3.2离心细胞,每管取1-5×105个细胞。

3.3在500μLJC-1工作溶液中重悬细胞(来自步骤1.2)。

3.4在室温或37°C下避光孵育10至30分钟。

3.5用HHBS或其他缓冲液洗涤细胞。将细胞重悬于500μLHHBS中以获得每管1-5×105个细胞。

3.6用荧光显微镜(使用FITC和TRITC滤光片)或流式细胞仪(使用FL1和FL2通道)观察Ex / Em = 490 / 525nm和490 / 590nm处的荧光变化。

 

参考文献

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Inhibition of mTOR's Catalytic Site by PKI-587 Is a Promising Therapeutic Option for Gastroenteropancreatic Neuroendocrine Tumor DiseaseAuthors: Helma Freitag, Friederike Christen, Florentine Lewens, Irina Grass, Franziska Briest, Sara Iwaszkiewicz, Britta Siegmund, Patricia GrabowskiJournal: Neuroendocrinology (2016)

Mesenchymal Stem Cells-Conditioned Media Ameliorates Diabetic Endothelial dysfunction by Improving Mitochondrial Bioenergetics via the Sirt1/AMPK/PGC-1α PathwayAuthors: Yujia Yuan, Meimei Shi, Lan Li, Jingping Liu, Bo Chen, Younan Chen, Xingxing An, Shuyun Liu, Ruixi Luo, Dan LongJournal: Clinical Science (2016): CS20160235

mTOR complex-2 stimulates acetyl-CoA and de novo lipogenesis through ATP citrate lyase in HER2/PIK3CA-hyperactive breast cancerAuthors: Yaqing Chen, Jianchang Qian, Qun He, Hui Zhao, Lourdes Toral-Barza, Celine Shi, Xuesai Zhang, Jiang Wu, Ker YuJournal: Oncotarget (2016): 25224--25240

Multiple Active Compounds from Viscum album L. Synergistically Converge to Promote Apoptosis in Ewing SarcomaAuthors: Monika Twardziok, Susann Kleinsimon, Jana Rolff, Sebastian Jäger, Angelika Eggert, Georg Seifert, Catharina I DelebinskiJournal: PloS one (2016): e0159749

ICG是一种特殊的荧光染料,可被波长范围在750~810 nm的外来光所激发,发射波长约840 nm的近红外光。局部注射的ICG可被淋巴系统吸收并与淋巴系统中的白蛋白结合,随淋巴系统引流至淋巴结*终回流至血液系统。由于淋巴系统转运缓慢,ICG可在淋巴系统内存在较长时间,ICG荧光成像技术正是基于以上原理,通过特殊的显像设备实现引流淋巴管和淋巴结的示踪。并且由于不同组织摄取ICG率不同,其可在术中分辨淋巴组织与胃周血管、脂肪、胰腺等其他组织。

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本文由齐岳Lh整理,2022-07-25 09:53:04

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