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CellMeter活细胞Caspase3/7结合检测试剂盒绿色荧光

我们的Cell Meter 活细胞半胱天冬酶活性检测试剂盒基于半胱天冬酶的荧光**剂。这些**剂具有细胞渗透性和非细胞毒性。一旦进入细胞,半胱天冬酶**剂与活性半胱天冬酶共价结合。胱天蛋白酶3/7的激活对于细胞凋亡的起始是重要的。已经证明胱天蛋白酶3/7对肽序列Asp-Glu-Val-Asp(DEVD)具有底物选择性。该试剂盒使用TF3-DEVD-FMK作为半胱天冬酶3/7活性的荧光指示剂。TF3-DEVD-FMK在凋亡细胞中不可逆地结合活化的胱天蛋白酶3/7。一旦与胱天蛋白酶3/7结合,荧光试剂保留在细胞内。结合**caspase 3/7,但不会阻止细胞凋亡的进行。

有多种参数可用于检测细胞凋亡。这种Cell Meter 活细胞半胱天冬酶3/7活性测定试剂盒旨在通过测量活细胞中胱天蛋白酶3/7的活化来检测细胞凋亡。它用于定量凋亡细胞中活化的caspase 3/7活性,或用于筛选caspase 3/7**剂。TF3-DEVD-FMK,红色标记试剂,允许通过荧光显微镜,流式细胞仪或荧光酶标仪直接检测凋亡细胞中活化的半胱天冬酶3/7。该试剂盒为所有必需组分提供优化的分析方案。

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适用仪器


流式细胞仪 
参数见表1
荧光显微镜 
推荐孔板:黑色透明
通道:见表1
荧光酶标仪 
推荐孔板:黑色孔板
通道:见表2

表1:用于流式细胞仪和荧光显微镜的荧光强度检测

 流式细胞仪荧光显微镜
FAM-DEVD-FMKFL1 通道FITC 通道
Propidium IodideFL2 通道TRITC 通道
Hoechst Dye紫色激光DAPI 通道

表2:荧光酶标仪的荧光强度检测

 激发发射cutoff
FAM-DEVD-FMKFL1 通道FITC 通道515nm
Propidium IodideFL2 通道TRITC 通道 
Hoechst Dye紫色激光DAPI 通道 
产品说明书

分离细胞的检测方案

概述

用测试化合物制备细胞,密度为5×105至2×106个细胞/ mL

将TF3-DEVD-FMK以1:150的比例加入细胞溶液中

在室温下孵育1小时

沉淀细胞,用缓冲液或生长培养基洗涤并重悬细胞

在Ex / Em = 550 / 595nm处分析细胞

注:使用前将所有部件在室温下解冻。

 

操作方法

1.根据您的特异性诱导方案,将细胞培养至*适于细胞凋亡诱导的密度,但不超过2 x 106个细胞/ mL。同时,对于每种标记条件,以与诱导群体相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞群。以下是一些诱导悬浮培养细胞凋亡的例子:

1)用2μg/ ml喜树碱处理Jurkat细胞3小时。

2)用1μM星形孢菌素处理Jurkat细胞3小时。

3)用4μg/ ml喜树碱处理HL-60细胞4小时。

4)用1μM星形孢菌素处理HL-60细胞4小时。

注意:应对每个细胞系进行单独评估,以确定诱导细胞凋亡的*佳细胞密度。

2.通过向TF3-DEVD-FMK(组分A)的小瓶中加入50μLDMSO制备150X TF3-DEVD-FMK DMSO储备溶液。 将150×TF3-DEVD-FMK以1:150的比例加入细胞溶液中,并将细胞在37℃,5%CO2培养箱中孵育1小时。

注1:对于TF3-DEVD-FMK标记,细胞可以浓缩至~5×10 6个细胞/ mL。 未使用的150X TF3-DEVD-FMK DMSO储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20°C。

注2:对于粘附细胞,用0.5mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整,并在用TF3-DEVD-FMK孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

注3:适当的孵育时间取决于所用的细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。

3.将细胞以约200g旋转5分钟,并用1mL洗涤缓冲液(组分B)洗涤细胞两次。 将细胞重悬于所需量的洗涤缓冲液中。

注1:TF3-DEVD-FMK是荧光的,因此清除任何未结合的试剂以消除背景非常重要。

注2:对于分离的细胞,应将细胞浓度调节至每个微量滴定板孔中2-5×10 5个细胞/100μL等分试样,用于步骤5。

4.如果需要,用DNA染色标记细胞(例如用于死细胞的Nuclear Green DCS1,或用于细胞核染色的整个群体的Hoechst)。

5.通过荧光显微镜,流式细胞仪或荧光酶标仪在Ex / Em = 550/595 nm处检测荧光强度(对于Nuclear Green DCS1,Ex / Em = 490/525 nm,对于Hoechst染料,Ex / Em = 350/461 nm)

5.1对于流式细胞仪,使用Ex / Em = 550/595 nm(用于Nuclear Green DCS1染色的FL1通道)的通道监测荧光强度。

5.2用于荧光显微镜和荧光酶标仪。 将100μL细胞悬浮液置于96孔黑色微量滴定板的每个孔中。

注意:如果需要平衡细胞浓度,调整诱导细胞的悬浮体积以接近非诱导细胞群的细胞密度。 如果您的细胞治疗不会导致受刺激细胞群数量的显着损失,则此调整步骤是可选的。

5.3使用TRITC通道(用于Nuclear Green DCS1染色的FITC通道,用于Hoechst染色的DAPI通道)在荧光显微镜下观察细胞。

5.4使用荧光酶标仪,使用Ex / Em = 550/595 nm(在570 nm处截止)底部读取模式监测荧光强度。

 

参考文献

An inner activation gate controls TMEM16F phospholipid scramblingAuthors: Trieu Le, Zhiguang Jia, Son C Le, Yang Zhang, Jianhan Chen, Huanghe YangJournal: Nature communications (2019): 1846

Drosophila Subdued is a moonlighting transmembrane protein 16 (TMEM16) that transports ions and phospholipidsAuthors: Trieu Le, Son C Le, Huanghe YangJournal: Journal of Biological Chemistry (2019): jbc--AC118

Helicobacter pylori Secreted Protein HP1286 Triggers Apoptosis in Macrophages via TNF-Independent and ERK MAPK-Dependent PathwaysAuthors: Raquel Tavares, Sushil Kumar PathakJournal: Frontiers in Cellular and Infection Microbiology (2017): 58

Death receptor 3 mediates necroptotic cell deathAuthors: Sebastian Bittner, Gertrud Knoll, Martin EhrenschwenderJournal: Cellular and Molecular Life Sciences (2016): 1--12

Helicobacter pylori protein JHP0290 exhibits proliferative and anti-apoptotic effects in gastric epithelial cellsAuthors: Raquel Tavares, Sushil Kumar PathakJournal: PloS one (2015): e0124407

 

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Cell Meter 活细胞Caspase 3/7结合检测试剂盒 红色荧光Q-20101

ICG是一种特殊的荧光染料,可被波长范围在750~810 nm的外来光所激发,发射波长约840 nm的近红外光。局部注射的ICG可被淋巴系统吸收并与淋巴系统中的白蛋白结合,随淋巴系统引流至淋巴结*终回流至血液系统。由于淋巴系统转运缓慢,ICG可在淋巴系统内存在较长时间,ICG荧光成像技术正是基于以上原理,通过特殊的显像设备实现引流淋巴管和淋巴结的示踪。并且由于不同组织摄取ICG率不同,其可在术中分辨淋巴组织与胃周血管、脂肪、胰腺等其他组织。

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本文由齐岳Lh整理,2022-07-25 09:53:04

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