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CellMeter荧光法细胞毒性检测试剂盒

Cell Meter 荧光法细胞毒性检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的细胞毒性检测试剂盒,Cell Meter检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列工具,包括细胞活性、细胞毒性、细胞凋亡、细胞膜电位以及细胞周期等方面的指标。每种检测方案均能提供不同荧光颜色的检测方案。这些高效的检测方案为从多角度研究细胞功能活动提供了一种十分有效的方法。有许多不同的参数都可以用来检验细胞活性。Cell Meter荧光法细胞毒性检测试剂盒提供了一种快速、简单、**、均一的一种荧光分析法来对细胞活性进行检测。本检测法是基于蓝色、非荧光性染料刃天青,接受了来自活细胞线粒体呼吸链中释放的电子时,被还原成粉红色荧光染料(试卤灵);通过对其颜色、荧光的变化的观察来实现检测。产物试卤灵的总量与活细胞数量成直接比例关系。对细胞的增殖性和细胞毒性检测,用本试剂盒比用其他检测法(例如,MTT)具有更高的灵敏度;因为本试剂盒的组分非常适合于低细胞毒性分析,并且能进行长时间保温(例如24~48小时)。本检测法可以便捷地用于96和384微孔板分析中。其高灵敏度(<100 CHO细胞),非放射性和无需洗脱,这些特性使本试剂盒适用于细胞增值性和细胞毒性的高通量扫描筛选,与许多化合物不同的是,它可以用于各种不同的实验平台中。本试剂盒提供所有必需组分和*佳检测方案。它适合于增殖型和非增殖型细胞,也可用于悬浮和贴壁细胞。96微孔板中,每孔用试剂20ul,本试剂盒提供的试剂足以进行1000次检测;384微孔板中,每孔加试剂10ul,本试剂盒提供的试剂足以进行2000次检测。齐岳生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供*优质的Cell Meter 荧光法细胞毒性检测试剂盒。 

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适用仪器


荧光酶标仪 
激发:540nm
发射:590nm
cutoff:570nm
推荐孔板:黑色透明
读取模式:底读模式
产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物(100μL/孔/ 96孔板或50μL/孔/ 384孔板)制备细胞2.添加1/5体积的分析溶液(组分A)3.将细胞在37℃,5%CO2培养箱中孵育1-24小时4.监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光强度(底部读取模式)(截止= 570 nm)

 

操作步骤

1.在具有黑色壁和透明底部的组织培养微孔板中每孔100至10,000个细胞。 将测试化合物添加到细胞中,并在37℃,5%CO2培养箱中孵育所需的一段时间(例如24,48或96小时)。 对于空白孔(没有细胞的培养基),加入相同量的化合物缓冲液。 对于96孔板,建议的总体积为100μL,对于384孔板,建议的总体积为50μL。

 

2.对照组设置2.1阳性对照:含有细胞和已知的增殖或细胞毒性诱导剂。
2.2阴性对照:含有细胞但不含有测试化合物。
2.3载体对照:含有细胞和用于递送测试化合物的载体。
2.4非细胞对照:含有不含细胞的生长培养基。 注意:血清中的LDH会导致背景荧光。
2.5测试化合物对照:含有用于递送测试化合物的载体[Hank's平衡盐溶液(HBSS)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)]和测试化合物。 一些测试化合物具有强自发荧光并且可能产生假阳性结果。 注意:对于96孔板,将所有对照的总体积与100μL匹配,对于具有生长培养基的384孔板,将所有对照的总体积与50μL相匹配。
 
3.将测定溶液(组分A)预热至37°C,并在开始实验前彻底混合。4.向每个孔中加入20μL/孔(96孔板)或10μL/孔(384孔板)的测定溶液(组分A)。 轻轻摇动平板30秒,混合试剂。5.将细胞在37°C,5%CO2培养箱中孵育1-24小时,避光。 注意:适当的孵育时间取决于单个细胞类型的代谢率和使用的细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。 由于刃天青可以转化为无色二氢呋喃,因此不推荐极长的孵育时间。6.在Ex / Em = 540 / 590nm(截止= 570nm)下用荧光酶标仪(底部读取模式)监测荧光强度。
 
数据分析
        从含有细胞的那些孔的值中减去来自非细胞对照孔的背景荧光读数。注意:空白孔的背景荧光可以根据生长培养基或微量滴定板的来源而变化。每个孔中的荧光读数表示该孔中的细胞数。根据以下公式计算样品和对照的细胞活力百分比:%细胞活力= 100×(Fsample-Fo)/(Fctrl-Fo)Fsample是在测试化合物存在下的荧光读数。Fctrl是不存在测试化合物(载体对照)时的荧光读数。Fo是平均背景(非细胞对照)荧光强度。        从空白标准孔获得的读数(RFU)用作阴性对照。从其他标准的读数中减去该值,以获得基线校正值。然后,绘制标准读数以获得标准曲线和方程。该等式可用于计算CHO-K1细胞样品。
图1.用Cell Meter 荧光细胞细胞毒性测定试剂盒测量CHO-K1细胞数量响应。 将0至10,000细胞/孔/100μL的CHO-K1细胞在Costar黑壁/透明底96孔板中接种过夜。 将细胞与20μL/孔的测定溶液(组分A)在37℃下孵育3小时。 用NOVOstar仪器(BMG Labtech)在Ex / Em = 540 / 590nm(截止值= 570nm)下测量荧光强度。 荧光强度与所示的细胞数呈线性关系(R2 = 0.998)。

 

参考文献

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Determination of the diagnostic value of the resazurin reduction assay for evaluating boar semen by receiver operating characteristic analysisAuthors: Zrimsek P, Kosec M, Kunc J, Mrkun J.Journal: Asian J Androl (2006): 343

Development and application of a resazurin-based biomass activity test for activated sludge plant managementAuthors: McNicholl BP, McGrath JW, Quinn JP.Journal: Water Res. (2006)

Development of resazurin microtiter assay for drug sensibility testing of Trypanosoma cruzi epimastigotesAuthors: Rolon M, Vega C, Escario JA, Gomez-Barrio A.Journal: Parasitol Res (2006): 103

Evaluation of the resazurin microtiter assay for rapid detection of ofloxacin resistance in M. tuberculosisAuthors: Umubyeyi AN, Martin A, Zissis G, Struelens M, Karita E, Portaels F.Journal: Int J Tuberc Lung Dis (2006): 808

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Comparative evaluation of the nitrate reduction assay, the MTT test, and the resazurin microtitre assay for drug susceptibility testing of clinical isolates of Mycobacterium tuberculosisAuthors: Montoro E, Lemus D, Echemendia M, Martin A, Portaels F, Palomino JC.Journal: J Antimicrob Chemother (2005): 500

Detection of mitochondrial respiratory dysfunction in circulating lymphocytes using resazurinAuthors: Abu-Amero KK, Bosley TM.Journal: Arch Pathol Lab Med (2005): 1295

 

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荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轮双键体系化学结构的化合物,受到紫外光或蓝紫光照射时,可激发成为激发态,当从激发态恢复基态时,发出荧光。荧光标记技术指利用荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上,利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。荧光标记的无放射物污染,操作简便等优点,使得荧光标记物在许多研究领域的应用日趋广。

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本文由齐岳Lh整理,2022-07-25 09:53:06

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