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CellMeterAnnexinV凋亡检测试剂盒绿色荧光405nm激发

我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞生存力的工具。 有多种参数可用于检测细胞活力。 该特定试剂盒旨在通过测量磷脂酰丝氨酸(PS)的转运来检测细胞凋亡。 在细胞凋亡中,PS转移到质膜的外部小叶。磷脂酰丝氨酸在细胞表面的出现是细胞凋亡初始/中间阶段的普遍指标,可以在观察形态变化之前进行检测。该试剂盒使用与PS特异性结合的荧光膜联蛋白V。 已经证明膜联蛋白V缀合物选择性结合PS。 使用带有525/40发射滤光片组的405激光器的流式细胞仪,对该特定的测定试剂盒进行了优化,以检测细胞凋亡。齐岳生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供*优质的Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒。

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适用仪器


流式细胞仪 
激发:405nm激光
发射:525/40nm滤波片
通道:AmCyan通道
荧光显微镜 
激发:紫色滤波片
发射:紫色滤波片
推荐孔板:黑色透明
产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 用测试化合物制备细胞(200 µL /样品)
  2. 添加膜联蛋白V-mFluor Violet 500分析溶液
  3. 在室温下孵育30-60分钟
  4. 使用带有525/40 nm滤光片(AmCyan通道)的流式细胞仪或带有紫色滤光片组的荧光显微镜分析细胞

 

实验步骤

1.用膜联蛋白V-mFluor Violet 500制备和孵育细胞:

1.1用测试化合物处理细胞一段时间(对于用星形孢菌素处理过的Jurkat细胞,需要4-6小时)以诱导细胞凋亡。

1.2离心细胞以获得1-5×105细胞/管。

1.3将细胞重悬于200 µL分析缓冲液(组分B)中。

1.4在细胞中加入2 µL Annexin V-mFluor Violet 500(组分A)。

1.5可选:向坏死的细胞中加入2 µL 100X碘化丙啶(组分C)。

1.6避光保存,于室温下孵育30至60分钟。

1.7在使用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前,添加300 µL分析缓冲液(组分B)以增加体积。

1.8使用带有525/40 nm滤光片的流式细胞仪(AmCyan通道)或带有紫色滤光片组的荧光显微镜检测荧光强度。

2.通过使用流式细胞仪进行分析:

2.1使用带有525/40 nm滤光片的流式细胞仪(AmCyan通道)定量膜联蛋白V-mFluor Violet 500结合。 将碘化丙啶加入细胞后,使用610/20 nm滤光片(PE-德克萨斯红通道)测量细胞活力。 注意:对贴壁细胞的膜联蛋白V结合流式细胞术分析未经过常规测试,因为在细胞分离或收获过程中可能会发生特定的膜损伤。 

3.通过使用荧光显微镜进行分析:

3.1孵育后用移液管吸移细胞悬液,用测定缓冲液冲洗1-2次,然后用测定缓冲液重悬细胞。

3.2将细胞添加到载玻片盖玻片的载玻片上。注意:对于贴壁细胞,建议直接在盖玻片上生长细胞。与膜联蛋白V-mFluor Violet 500一起孵育后,用测定缓冲液冲洗1-2次,然后将测定缓冲液加到盖玻片上。将玻片上的盖玻片倒置并可视化细胞。与膜联蛋白V-mFluor Violet 500孵育后,还可以将细胞固定在2%甲醛中,并在显微镜下观察。

3.3使用紫罗兰滤光片组在荧光显微镜下用膜联蛋白V-mFluor Violet 500分析凋亡细胞。当碘化丙锭添加到细胞中时,使用TRITC通道测量细胞活力。质膜上的绿色染色表明膜联蛋白V-mFluor Violet 500与细胞表面的PS结合。

 

参考文献

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ICG是一种特殊的荧光染料,可被波长范围在750~810 nm的外来光所激发,发射波长约840 nm的近红外光。局部注射的ICG可被淋巴系统吸收并与淋巴系统中的白蛋白结合,随淋巴系统引流至淋巴结*终回流至血液系统。由于淋巴系统转运缓慢,ICG可在淋巴系统内存在较长时间,ICG荧光成像技术正是基于以上原理,通过特殊的显像设备实现引流淋巴管和淋巴结的示踪。并且由于不同组织摄取ICG率不同,其可在术中分辨淋巴组织与胃周血管、脂肪、胰腺等其他组织。

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本文由齐岳Lh整理,2022-07-25 09:53:14

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