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PhosphoWorks发光法ATP检测试剂盒*温和发光*

PhosphoWorks 发光法ATP检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测ATP的试剂盒,腺苷三磷酸(ATP)在细胞能量学,代谢调节和细胞信号传导中起重要作用。 PhosphoWorks ATP检测试剂盒提供快速,简单和均匀的发光检测,用于测定哺乳动物细胞中的细胞增殖和细胞毒性。 可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式进行测定。 该测定的高灵敏度允许在许多生物系统,环境样品和食物中检测ATP。 这种PhosphoWorks ATP检测试剂盒具有长达4小时的稳定发光信号。 它具有稳定的发光,不需要混合或分离,并配制成具有*小的手动操作时间。齐岳生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供*优质的PhosphoWorks 发光法ATP检测试剂盒。 

 

适用仪器


发光酶标仪 
推荐孔板:白色孔板
产品说明书

操作步骤

简要概述

1.用测试化合物(100μL/ 96孔板或25μL/ 384孔板)制备细胞(样品)2.加入等体积的ATP工作溶液(100μL/ 96孔板或25μL/ 384孔板)3.在室温下孵育10-20分钟4.监测发光强度

 

溶液制备

1.将整瓶10 mL反应缓冲液(组分C)转移到ATP(组分B)中并充分混合。

2.将20μLATP监测酶(组分A)加入到组分B + C的瓶中并充分混合以制备ATP工作溶液。 注意:避免来自外源生物来源的潜在污染。

有关细胞样品制备的指南(点击查看)

 

样品试验方案

1运行ATP测定:

1.1用测试化合物处理细胞(或样品),在96孔板中加入10μL10X化合物,或在所需化合物缓冲液中加入5μL5X化合物用于384孔板。对于空白孔(没有细胞的培养基),加入相应量的化合物缓冲液。

1.2将细胞板在37℃,5%CO 2培养箱中孵育所需的一段时间,例如24,48或96小时。

1.3向每个孔中加入100μL(96孔板)或25μL(384孔板)的ATP工作溶液。

1.4在室温下孵育10-20分钟。

1.5用标准发光计监测发光强度。

 

2.生成标准ATP校准曲线:

        如果需要计算样品中ATP的**量,则应与上述分析一起生成ATP标准曲线。

2.1通过包含不含ATP的样品(作为对照)用于测量背景发光,在含有0.1%BSA的PBS缓冲液中制备一系列ATP稀释液。注意:通常ATP浓度从1 nM到10μM是合适的。

2.2将相同量的稀释的ATP溶液加入空板中(对于96孔板为100μL或对于384孔板为25μL)。

2.3加入100μL/孔(96孔板)或25μL/孔(384孔板)的ATP工作溶液。

2.4将反应混合物在室温下孵育10至20分钟。

2.5用标准光度计监测发光强度。

2.6生成ATP标准曲线。

 

数据分析

        从空白标准孔获得的读数(RLU)用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值,以获得基线校正值。 然后,绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算ATP样品。 我们建议使用在线线性回归计算器,该计算器可在以下位置找到:

图1.使用PhosphoWorks发光ATP检测试剂盒测量ATP剂量反应。 以1秒间隔监测10μM至0.1nM的ATP浓度长达5小时。

 

参考文献

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The Different Effects of Atorvastatin and Pravastatin on Cell Death and PARP Activity in Pancreatic NIT-1 CellsAuthors: Ya-Hui Chen, Yi-Chun Chen, Chin-San Liu, Ming-Chia HsiehJournal: Journal of Diabetes Research (2016)

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Loss of histone deacetylase Hdac1 disrupts metabolic processes in intestinal epithelial cellsAuthors: Alexis Gonneaud, Naomie Turgeon, Frančois-Michel Boisvert, Frančois Boudreau, Claude AsselinJournal: FEBS letters (2015): 2776--2783

A neutrophil intrinsic impairment affecting Rab27a and degranulation in cystic fibrosis is corrected by CFTR potentiator therapyAuthors: Kerstin Pohl, Elaine Hayes, Joanne Keenan, Michael Henry, Paula Meleady, Kevin Molloy, Bakr Jundi, David A Bergin, Cormac McCarthy, Oliver J McElvaneyJournal: Blood (2014): 999--1009

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G protein coupled receptor kinase 2 interacting protein 1 (GIT1) is a novel regulator of mitochondrial biogenesis in heartAuthors: Jinjiang Pang, Xiangbin Xu, Michael R Getman, Xi Shi, Stephen L Belmonte, Heidi Michaloski, Amy Mohan, Burns C Blaxall, Bradford C BerkJournal: Journal of molecular and cellular cardiology (2011): 769--776

 

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ICG 是一种三碳花青型染料,具有 NIR 吸收特性(约 800 nm 的峰值吸收)和 807 nm 处的发射(10% v/vDMSO/PBS)。可见光范围内的吸收很小,这导致 NIR 波长(700-900 nm)处的自发荧光、组织吸光度和散射较低。

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本文由齐岳Lh整理,2022-07-25 09:53:21

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