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钙离子荧光探针Fura-8FF,五钾盐

细胞不渗透的Fura-8FF是Fura-8的类似物,钙结合亲和力低得多,Kd〜10 µM。Fura-8FF的发射转变为更长的可见光波长,与普通滤光片组兼容。例如,通过监测530nm处的发射强度来计算354nm和415nm处的激发强度比。齐岳生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供*优质的钙离子荧光探针Fura-8FF , 五钾盐。 

钙离子篇:时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

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产品说明书

使用Cal-520 AM,Cal-570 AM或Cal-630 AM酯类

1.使用Cal-520 ,Cal-590 或Cal-630 AM酯:

        AM酯是非极性酯,其易于穿过活细胞膜,并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是,使用AM酯时必须小心,因为它们易于水解,特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜(DMSO)。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下,AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南,实际应根据您的具体需求进行修改。

a)在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b)在实验当天,将Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液(HHBS)或您选择的缓冲液(0.04%Pluronic®F-127)中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意:非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c)如果您的细胞(如CHO细胞)含有有机阴离子转运蛋白,可将丙磺舒(1-2 mM)加入染料工作溶液中(*终浓度为0.5-1 mM)以减少渗漏去酯化指标。

d)将等体积的染料工作溶液(来自步骤b或c)加入细胞板中。

e)将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟,然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意:孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f)用HHBS或您选择的缓冲液(含有阴离子转运蛋白**剂,如1mM丙磺舒,如果适用)替换染料工作溶液,以去除多余的探针。

g)在Ex / Em = 490 / 525nm(对于Cal-520 AM),540 / 5000nm(对于Cal-590 AM)或600 / 640nm(对于Cal-630 AM)进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应:

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd,使用以下等式:

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光,Fmin是不存在钙时的荧光,Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数(Kd)是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比,荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者,细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

参考文献

Spatio-temporal modulation of light for stimulation and recording of neuronal activityAuthors: He Ma, Michael Lawrence Castanares, Vincent DariaJournal: (2018): 1072306

A Critical Period for the Rapid Modification of Synaptic Properties at the VPm Relay SynapseAuthors: Libiao Pan, Junhua Yang, Qian Yang, Xiaomeng Wang, Liya Zhu, Yali Liu, Huifang Lou, Chou Xu, Ying Shen, Hao WangJournal: Frontiers in molecular neuroscience (2017)

Advances in Two-Photon Scanning and Scanless Microscopy Technologies for Functional Neural Circuit ImagingAuthors: Simon R Schultz, Caroline S Copeland, Amanda J Foust, Peter Quicke, Renaud SchuckJournal: Proceedings of the IEEE (2017): 139--157

Bidirectional communication between sensory neurons and osteoblasts in an in vitro co-culture systemAuthors: Daisuke Kodama, Takao Hirai, Hisataka Kondo, Kazunori Hamamura, Akifumi TogariJournal: FEBS Letters (2017)

Ca 2+ signals initiate at immobile IP 3 receptors adjacent to ER-plasma membrane junctionsAuthors: Nagendra Babu Thillaiappan, Alap P Chavda, Stephen C Tovey, David L Prole, Colin W TaylorJournal: Nature Communications (2017): 1505

Calcium Imaging Across Large Areas of Intact Vascular Endothelium Reveals Stimulus-Specific Sensory CellsAuthors: Matthew D Lee, Calum Wilson, John G McCarronJournal: The FASEB Journal (2017): 1005--8

Calcium transient assays for compound screening with human iPSC-derived cardiomyocytes: Evaluating new toolsAuthors: Neil J Daily, Radleigh Santos, Joseph Vecchi, Pinar Kemanli, Tetsuro WakatsukiJournal: Journal of evolving stem cell research (2017): 1

Characterization of postsynaptic calcium signals in the pyramidal neurons of anterior cingulate cortexAuthors: Xu-Hui Li, Qian Song, Tao Chen, Min ZhuoJournal: Molecular Pain (2017): 1744806917719847

Direct measurement of TRPV4 and PIEZO1 activity reveals multiple mechanotransduction pathways in chondrocytesAuthors: M Rocio Servin-Vences, Mirko Moroni, Gary R Lewin, Kate PooleJournal: eLife (2017): e21074

Expression of the GluA2 subunit of glutamate receptors is required for the normal dendritic differentiation of cerebellar Purkinje cellsAuthors: Masahiko Tanaka, Tomomi Senda, Naohide HirashimaJournal: Neuroscience Letters (2017)

 

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本文由齐岳Lh整理,2022-07-25 09:55:33

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