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CellMeter2-NBDG葡萄糖摄取检测试剂盒

2-NBDG 葡萄糖摄取检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测葡萄糖的试剂盒,葡萄糖代谢是将葡萄糖转化为能量的过程,是大多数生物体中能量供应的主要来源。 2-NBDG [2-(N-(7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑-4-基)氨基)-2-脱氧葡萄糖],一种荧光标记的葡萄糖示踪剂,已被证明可有效监测葡萄糖转运在细胞中,2-NBDG通过与葡萄糖相同的葡萄糖转运蛋白(GLUT)转运到细胞中。一旦2-NBDG在细胞中被摄取,它就在C-6位置发生磷酸化,得到2-NBDG-6-磷酸,它很好地保留在细胞内。与其他葡萄糖示踪剂(例如2-DG或FDG)相比,2-NBDG允许在单细胞水平上具有高时间和空间分辨率的2-NBDG的原位测量。 AAT Bioquest的Cell Meter 2-NBDG葡萄糖摄取分析试剂盒提供灵敏的非放射性分析,用于测量培养细胞中的葡萄糖摄取。在该试剂盒中,分析缓冲液I用于增强细胞中2-NBDG的摄取和保留,而分析缓冲液II可以改善细胞中2-NBDG的信号背景比。可以通过荧光显微镜或具有FITC滤波片组的流式细胞仪检测荧光信号。 Cell Meter 2-NBDG葡萄糖摄取分析试剂盒是检测葡萄糖转运蛋白的*强大工具。齐岳生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供*优质的2-NBDG 葡萄糖摄取检测试剂盒。

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适用仪器


流式细胞仪 
激发:488nm激光
发射:530/30nm滤波片
通道:FITC通道
荧光显微镜 
激发:FITC滤波片
发射:FITC滤波片
推荐孔板:黑色透明
产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.用您的测试化合物准备细胞2.加入2-NBDG染色溶液3.将细胞在37ºC孵育20分钟4.去除2-NBDG染色溶液5.用测定缓冲液I洗涤细胞6.使用荧光显微镜或具有FITC滤波器/通道的流式细胞仪分析细胞

 

工作溶液配制

        将5μL的2-NBDG(10mg / mL)(组分A)加入1.5mL的测定缓冲液I(组分B)中并充分混合以制备2-NBDG染色溶液。 避光。 注意:该2-NBDG染色溶液在室温下稳定1小时。 由于*佳染色条件可能根据不同的细胞类型而变化,因此建议确定每个特定实验的组分A的*佳浓度。有关细胞样品制备的指南,请点击查看

 

操作步骤

1.将测试化合物加入细胞中并在37℃,5%CO2培养箱中孵育所需的一段时间(例如24,48或96小时)。对于空白孔(没有细胞的培养基),加入相同量的化合物缓冲液。注意:应对每个细胞系进行单独评估,以确定*佳细胞密度和孵育时间。我们将CHO-K1细胞与20mM葡萄糖一起孵育用于葡萄糖竞争测定,并将100μMPhloretin用于GLUT**测定。

2.在处理结束时,在实验前将制动器以800rpm离心5分钟。

3.在不干扰细胞的情况下吸出上清液。

4.加入100μL/孔(96孔板)或25μL/孔(384孔板)的2-NBDG染色溶液。注意:需要确定每个细胞系和每个特定实验的*佳孵育时间。我们将CHO-K1细胞在37℃下与100μM2-NBDG(~34μg/ mL)孵育20分钟以显示足够的葡萄糖摄取。

5.在孵育结束时,将板以800rpm离心5分钟。

6.去除2-NBDG染色溶液,不干扰细胞。

7.对于荧光显微镜:用测定缓冲液I(组分B)洗涤细胞一次。将细胞保持在100μL/孔(96孔板)或25μL/孔(384孔板)的测定缓冲液II(组分C)中。使用带有FITC过滤器的荧光显微镜监测荧光信号。

8.对于流式细胞仪:如果需要,使用EDTA分离细胞,并在100μL/样品分析缓冲液I(组分B)中重悬细胞。使用带有FITC通道的流式细胞仪监测荧光信号。

 

数据分析

图1.使用Cell Meter 2-NBDG葡萄糖摄取测定试剂盒在CHO-K1细胞中摄取2-NBDG的荧光图像。将40,000个细胞/孔/100μL的CHO-K1细胞在96孔黑色壁/透明底板中接种过夜。将细胞用20mM葡萄糖(B)或100μMPhloretin(C)在37℃处理1小时,然后与100μM2-NBDG染色溶液一起温育20分钟。 未处理的对照细胞在相同条件下染色。使用具有FITC滤光器的荧光显微镜测量荧光信号。

 

参考文献

NT1014, a novel biguanide, inhibits ovarian cancer growth in vitro and in vivoAuthors: Lu Zhang, Jianjun Han, Amanda L Jackson, Leslie N Clark, Joshua Kilgore, Hui Guo, Nick Livingston, Kenneth Batchelor, Yajie Yin, Timothy P GilliamJournal: Journal of Hematology & Oncology (2016): 91

Glutamine promotes ovarian cancer cell proliferation through the mTOR/S6 pathwayAuthors: Lingqin Yuan, Xiugui Sheng, Adam K Willson, Dario R Roque, Jessica E Stine, Hui Guo, Hannah M Jones, Chunxiao Zhou, Victoria L Bae-JumpJournal: Endocrine-related cancer (2015): 577--591

荧光染料,由于灵敏度高,操作方便,逐渐取代了放射性同位素作为检测标记,其广应用于荧光免疫,荧光探针,细胞染色等。包括特异性的DNA染色,用于染色体分析、细胞周期、细胞凋亡等相关研究。另有很多核酸染料在多色染色系统中是很有用的复染剂,可作为背景对照,标记细胞核使细胞内结构的空间关系一目了然。

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本文由齐岳Lh整理,2022-07-26 09:40:48

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