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活性氧CellMeter荧光法胞内总ROS检测试剂盒红色荧光

活性氧(ROS)是氧正常代谢的天然副产物,在细胞信号传导中起重要作用。但是,在与氧化应激相关的状态下,ROS水平会急剧增加。 ROS的积累会严重破坏细胞结构。氧化应激在心血管疾病,糖尿病,骨质疏松症,中风,炎性疾病,许多神经退行性疾病和*症中的作用已得到公认。 ROS测量将有助于确定氧化应激如何调节各种细胞内途径。 Amplite 荧光ROS检测试剂盒使用我们独特的ROS指示剂来定量活细胞中的ROS。 Amplite ROS Red具有细胞渗透性。与ROS反应时会产生红色荧光。该试剂盒是一种优化的“混合和读取”测定形式。 Amplite 荧光ROS测定试剂盒提供了一种灵敏的一步荧光测定法,可在1-2小时的孵育中检测活细胞中的细胞内ROS。该测定可以以方便的96孔或384孔板形式进行,无需分离步骤即可轻松实现自动化。使用荧光酶标仪或荧光显微镜可以轻松读取其信号。它可用于定量ROS活性或筛选ROS**剂。齐岳生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供*优质的Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒。

活性氧(ROS)篇:包含总ROS和多种活性氧离子检测试剂大全

 

适用仪器


荧光显微镜 
激发:520nm
发射:605nm
推荐孔板:黑色透明
滤波片:Texas Red滤波片组
荧光酶标仪 
激发:520nm
发射:605nm
cutoff:590nm
推荐孔板:黑色透明
读取模式:底读模式
产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 在生长培养基中准备细胞
  2. 加入Amplite ROS Red工作溶液(对于96孔板为100 µL /孔,对于384孔板为25 µL /孔)
  3. 在37°C下孵育细胞1小时
  4. 用测试化合物处理细胞以诱导ROS
  5. 在Ex / Em = 520/605 nm(截止= 590 nm)或安装Ex / Em = 520/605 nm滤光片的荧光显微镜下检测荧光增加(底部读取模式)

 

溶液配制

储备溶液配制

1. Amplite ROS Red储备液(500X):将40 µL DMSO(组分C)添加到Amplite ROS Red(组分A)的小瓶中,并充分混合以制成500X Amplite ROS Red储备液。 避光。 注意:20 µL 500X Amplite ROS Red储备液足以用于1个板。 注意:如果将试管紧密密封并避免光照,可以将未使用的部分等分并在<-20°C下保存超过一个月。 避免重复冻融循环。

 

工作溶液配制

将20 µL 500X Amplite ROS Red储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液(组分B)中,并充分混合以制成Amplite ROS Red工作溶液。 注意:此Amplite ROS Red工作溶液在室温下至少可稳定2小时。

 

实验步骤

1.将100 µL /孔(96孔板)或25 µL /孔(384孔板)的Amplite ROS Red工作溶液添加到细胞板中。

2.将细胞在5%CO2、37°C的培养箱中孵育一小时。

3.在所需的缓冲液(例如PBS或HHBS)中,用20µL 11X测试化合物(96孔板)或10 µL 6X测试化合物(384孔板)处理细胞。 对于对照孔(未处理的细胞),添加相应量的化合物缓冲液。

4.要诱导ROS,请在室温下或在5%CO2、37°C的培养箱中孵育细胞板至少15分钟(对于用1 mM H2O2处理的Hela细胞为30分钟)。

5.在Ex / Em = 520/605 nm(截止= 590 nm)处使用荧光酶标仪(底部读取模式)检测荧光的增加,或在Ex / Em = 520/605 nm滤光片组(Texas Red)下使用荧光显微镜观察细胞)。

 

参考文献

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Superoxide dismutase as a target of clioquinol-induced neurotoxicityAuthors: Kawamura, Kazuyuki and Kuroda, Yukiko and Sogo, Masako and Fujimoto, Miki and Inui, Toshio and Mitsui, TakaoJournal: Biochemical and biophysical research communications (2014): 181--185

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High glucose-induced mitochondrial respiration and reactive oxygen species in mouse cerebral pericytes is reversed by pharmacological inhibition of mitochondrial carbonic anhydrases: implications for cerebral microvascular disease in diabetesAuthors: Shah, Gul N and Morofuji, Yoichi and Banks, William A and Price, Tulin OJournal: Biochemical and biophysical research communications (2013): 354--358

Automatic flow injection based methodologies for determination of scavenging capacity against biologically relevant reactive species of oxygen and nitrogenAuthors: Magalhaes LM, Lucio M, Segundo MA, Reis S, Lima JL.Journal: Talanta (2009): 1219

Diabetes and the impairment of reproductive function: possible role of mitochondria and reactive oxygen speciesAuthors: Amaral S, Oliveira PJ, Ramalho-Santos J.Journal: Curr Diabetes Rev (2008): 46

荧光染料,由于灵敏度高,操作方便,逐渐取代了放射性同位素作为检测标记,其广应用于荧光免疫,荧光探针,细胞染色等。包括特异性的DNA染色,用于染色体分析、细胞周期、细胞凋亡等相关研究。另有很多核酸染料在多色染色系统中是很有用的复染剂,可作为背景对照,标记细胞核使细胞内结构的空间关系一目了然。

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本文由齐岳Lh整理,2022-07-26 09:42:40

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