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CellMeter细胞自噬检测试剂盒蓝色荧光

Cell Meter 细胞自噬检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞自噬的试剂盒,自噬是一种进化上保守的降解过程,其靶向长寿命蛋白质,细胞器和其他细胞质成分,通过溶酶体途径降解。自噬途径与遍在蛋白 - 蛋白酶体途径的作用互补,其通常降解短寿命蛋白质。多重细胞作用需要激活自噬途径,包括饥饿期间的存活,细胞内组分的清除,发育和免疫。在没有压力的情况下,自噬具有管家功能,去除受损的细胞器和细胞成分,防止细胞毒性作用。自噬的减少和缺陷与多种疾病有关,例如Huntingtons,Alzheimers和Parkinsons。就*症发展而言,自噬似乎扮演着多重角色。某些自噬蛋白(如Beclin-1和Bif-1)的表达减少或缺失会增加小鼠的肿*易感性,而这些蛋白的过表达可***细胞的生长。然而,自噬对于实体*的营养不良和缺氧核心内的*细胞的存活是至关重要的。 Cell Meter 自噬试剂盒使用Autophagy Blue 作为特异性自噬体标记来分析自噬的活性。该测定被优化用于直接检测分离和附着细胞中的自噬。该试剂盒为分析方案提供了所有必需的组分。 Cell Meter 自噬试剂盒适用于荧光显微镜,荧光酶标仪和流式细胞仪。 Autophagy Blue 在Ex / Em = 333 / 518nm处具有荧光激发和发射。齐岳生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供*优质的Cell Meter 细胞自噬检测试剂盒。

 

适用仪器


荧光显微镜 
激发:DAPI通道
发射:DAPI通道
推荐孔板:黑色透明
荧光酶标仪 
激发:330nm
发射:520nm
cutoff:475nm
推荐孔板:黑色透明
读取模式:底读模式
产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物制备细胞,密度为1 - 2×104个细胞/孔2.添加Autophagy Blue 工作溶液3.在37°C孵育15-60分钟4.用洗涤缓冲液洗涤细胞5.监测Ex / Em = 330 / 520nm处的荧光增加(截止= 475nm),使用DAPI滤光片组的荧光显微镜或使用Ex / Em = 330 / 520nm通道的流式细胞仪

 

工作溶液配制

将20μL500XAutophagy Blue (组分A)加入10 mL染色缓冲液(组分B)中并充分混合以制备Autophagy Blue 工作溶液。 避光。 注意:对于一个96孔板,20μL的500X Autophagy Blue (组分A)就足够了。有关细胞样品制备的指南,请点击查看

 

操作步骤

1.根据您的特异性诱导方案(约1-2×104个细胞/孔/ 96孔板)将细胞培养至*适于自噬诱导的密度。同时,对于每种标记条件,以与诱导群体相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞群。

2.去除培养基

3.向每个孔中加入100μL/孔(96孔板)或25μL/孔(384孔板)的Autophagy Blue 工作溶液。

4.将细胞在37°C,5%CO2培养箱中孵育15至60分钟。注意:适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。

5.用洗涤缓冲液(组分C)洗涤细胞3-4次,然后向每个孔中加入100μL洗涤缓冲液(组分C)。注意:如果细胞看起来没有充分染色,建议增加标记浓度或孵育时间以使染料积累。

6.用荧光酶标仪在Ex / Em = 330 / 520nm(截止= 475nm),具有DAPI滤光器组的荧光显微镜或具有Ex / Em = 330 / 520nm通道的流式细胞仪监测荧光强度。

 

数据分析

图1.使用Cell Meter 自噬测定试剂盒在HeLa细胞中通过饥饿诱导自噬Blue 标记的囊泡。 将Hela细胞在作为对照(A)的常规DMEM培养基中或在血清耗尽的培养基中作为自噬处理(B)孵育16小时。 将对照细胞和饥饿细胞与Autophagy Blue 工作溶液一起在37℃,5%CO2培养箱中孵育30分钟,然后用洗涤缓冲液洗涤四次。 在具有DAPI通道的荧光显微镜下立即对细胞成像。 通过自噬泡的亮蓝点染色表明自噬(B)。

 

参考文献

Sonodynamic therapy inhibits palmitate-induced beta cell dysfunction via PINK1/Parkin-dependent mitophagyAuthors: Tian Guo, Tianyang Liu, Yun Sun, Xianna Liu, Rongguo Xiong, He Li, Zhitao Li, Zhiguo Zhang, Zhen Tian, Ye TianJournal: Cell death & disease (2019): 457

Methods for Measuring Autophagy Levels in DiseaseAuthors: Kanchan Phadwal, Dominic KurianJournal: (2017): 195--211

High glucose induces bone marrow-derived mesenchymal stem cell senescence by upregulating autophagyAuthors: Tzu-Ching Chang, Min-Fen Hsu, Kenneth K WuJournal: PloS one (2015): e0126537

Licochalcone A induces autophagy through PI3K/Akt/mTOR inactivation and autophagy suppression enhances Licochalcone A-induced apoptosis of human cervical cancer cellsAuthors: Jen-Pi Tsai, Chien-Hsing Lee, Tsung-Ho Ying, Chu-Liang Lin, Chia-Liang Lin, Jung-Tsung Hsueh, Yi-Hsien HsiehJournal: Oncotarget (2015): 28851

 

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Cell Meter 细胞自噬检测试剂盒 绿色荧光Q-23002

荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轮双键体系化学结构的化合物,受到紫外光或蓝紫光照射时,可激发成为激发态,当从激发态恢复基态时,发出荧光。荧光标记技术指利用荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上,利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。荧光标记的无放射物污染,操作简便等优点,使得荧光标记物在许多研究领域的应用日趋广。

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本文由齐岳Lh整理,2022-07-26 09:42:38

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